Nature.com-a gireniňiz üçin sag boluň.Ulanylýan brauzer wersiýaňyzyň çäkli CSS goldawy bar.Iň oňat tejribe üçin täzelenen brauzeri ulanmagy maslahat berýäris (ýa-da Internet Explorer-de Gabat geliş tertibini öçüriň).Şol aralykda, dowamly goldawy üpjün etmek üçin sahypany stil we JavaScript bolmazdan hödürläris.
Öýken kistik fibrozyny bejermek üçin gen wektorlary geçiriji howa ýollaryna gönükdirilmelidir, sebäbi öýkeniň periferiýa geçişiniň bejeriş täsiri ýok.Wirus ýokaşdyrmagyň netijeliligi daşaýjynyň ýaşaýan wagty bilen gönüden-göni baglanyşyklydyr.Şeýle-de bolsa, gen göterijiler ýaly gowşuryjy suwuklyklar dem alma wagtynda tebigy alveolalara ýaýraýar we islendik görnüşdäki bejeriş bölejikleri mukoz transporty bilen çalt aýrylýar.Dem alyş ýollarynda gen göterijileriň ýaşamak möhletini uzaltmak möhümdir, ýöne ýetmek kyn.Dem alyş ýollarynyň ýüzüne gönükdirilip bilinýän daşaýjy-konýugirlenen magnit bölejikleri sebitleýin nyşany gowulaşdyryp biler.“Vivo” şekillendirişindäki kynçylyklar sebäpli, şeýle magnit bölejikleriniň howa ýolunyň üstünde ulanylýan magnit meýdanynyň barlygynda özüni alyp barşyna gowy düşünilmeýär.Bu gözlegiň maksady, sinhrotron şekillendirişini, wivo içindäki ýeke we köp bölejikleriň hereketiniň dinamikasyny we nagyşlaryny öwrenmek üçin anestizirlenen syçanlaryň trahaýasyndaky bir topar magnit bölejikleriniň hereketini wivo görnüşinde görmek üçin ulanmakdy.Mundan başga-da, magnit meýdanynyň barlygynda ysly magnit bölejikleriniň gowşurylmagynyň, syçanyň trahaýasynda geçişiň netijeliligini ýokarlandyrjakdygyna baha berdik.Sinhrotron rentgen şekili magnit bölejikleriniň stasionar we hereket edýän magnit meýdanlarynda vitro we wivo görnüşlerini görkezýär.Bölejikleri magnit ulanyp, janly howa ýollarynyň üstünden aňsatlyk bilen süýräp bolmaýar, ýöne ulag wagtynda ýataklar magnit meýdanynyň iň güýçli bolan ýerinde jemlenýär.Ygtyýarly magnit bölejikleri magnit meýdanynyň barlygynda geçirilende netijelilik alty esse ýokarlandy.Bu netijeler bilelikde alnanda, merkezi wirus magnit bölejikleriniň we magnit meýdanlarynyň wivo-da geçiriji howa ýollarynda gen wektoryny nyşana almagy we geçiriş derejesini gowulandyrmak üçin gymmatly çemeleşmeler bolup biljekdigini görkezýär.
Kistik fibroz (CF), CF transmembranany geçiriji sazlaýjy (CFTR) diýilýän bir geniň üýtgemegi bilen ýüze çykýar.CFTR belogy, kistiki fibrozyň patogeneziniň esasy ýeri bolan howa ýollaryny goşmak bilen, bedeniň köp epitel öýjüklerinde bar bolan ion kanalydyr.CFTR-de ýüze çykan kemçilikler, adaty bolmadyk suw daşamagyna, howa ýollarynyň suwsuzlanmagyna we howa ýollarynyň üstündäki suwuklyk gatlagynyň (ASL) çuňlugynyň peselmegine sebäp bolýar.Şeýle hem, mukozili transport (MCT) ulgamynyň dem alýan bölejikleriň we patogenleriň howa ýollaryny arassalamak ukybyna zyýan ýetirýär.Biziň maksadymyz, CFTR geniniň dogry göçürmesini bermek we ASL, MCT we öýken saglygyny gowulandyrmak üçin ysmaz (LV) gen terapiýasyny ösdürmek we bu parametrleri vivo1-de ölçäp biljek täze tehnologiýalary ösdürmegi dowam etdirmek.
LV wektorlary, esasan, terapewtiki geni howa ýollarynyň bazal öýjüklerine (howa ýollarynyň baldak öýjüklerine) hemişelik birleşdirip bilýändigi sebäpli kistik fibroz gen terapiýasy üçin öňdebaryjy dalaşgärlerden biridir.Bu möhümdir, sebäbi olar kistiki fibroz bilen baglanyşykly funksional gen düzedilen howa ýollarynyň öýjüklerine bölünip, adaty gidrasiýa we mukus arassalanyşyny dikeldip bilerler, bu bolsa ömürboýy peýda getirer.LV wektorlary geçiriji howa ýollaryna garşy gönükdirilmelidir, sebäbi şu ýerde öýkeniň CF-e gatnaşmagy başlaýar.Wektoryň öýkenine has çuňňur gowşurylmagy alveolýar transduksiýa sebäp bolup biler, ýöne kistiki fibrozda bejeriş täsiri ýok.Şeýle-de bolsa, gen göterijiler ýaly suwuklyklar çaga doglandan soň dem alanda tebigy alveolalara geçýär we bejeriş bölejikleri MCT-ler tarapyndan agyz boşlugyna çalt çykarylýar.LV geçirişiniň netijeliligi, wektoryň öýjükli kabul edilmegine mümkinçilik berýän wektoryň maksatly öýjüklere ýakyn bolmagy bilen gönüden-göni baglanyşyklydyr - adaty sebit howa akymy, şeýle hem mukus we MCT bölejikleriniň utgaşdyrylmagy bilen aňsatlyk bilen gysgaldylan “ýaşaýyş wagty” 5.Kistik fibroz üçin howa ýollarynda LV ýaşamagyň möhletini uzaltmak ukyby bu ugurda ýokary geçiş derejesine ýetmek üçin möhümdir, ýöne şu wagta çenli kyn.
Bu päsgelçiligi ýeňip geçmek üçin LV magnit bölejikleriniň (MP) iki goşmaça usulda kömek edip biljekdigini teklip edýäris.Birinjiden, nyşana almagy gowulandyrmak we gen göteriji bölejikleriň howa ýolunyň dogry ýerinde bolmagyna kömek etmek üçin magnit bilen howa ýolunyň ugruna ugrukdyrylyp bilner;Deputatlar antikorlara, himiýa bejergisine ýa-da öýjük membranalaryna birikdirilen ýa-da degişli öýjük üstündäki reseptorlaryna baglanýan we çiş ýerlerinde ýygnanan beýleki neşe molekulalary bilen baglanyşanda, neşe serişdelerini maksatly ulag hökmünde giňden ulanylýar. statiki elektrik energiýasynyň bolmagy.Rak bejergisi üçin magnit meýdanlary 7. Beýleki “gipertermiki” usullar yrgyldama magnit meýdanlaryna sezewar bolanda deputatlary gyzdyrmak arkaly çiş öýjüklerini öldürmäge gönükdirilendir.DNK-nyň öýjüklere geçmegini güýçlendirmek üçin magnit meýdany transfeksiýa serişdesi hökmünde ulanylýan magnit transfeksiýa prinsipi, öýjük çyzyklary üçin kyn wirusly we wirusly gen wektorlaryny ulanyp, vitroda ulanylýar; ..Statiki magnit meýdanynyň barlygynda adam bronhial epiteliniň öýjük çyzygyna LV MP in vitro bilen gowşurylyşy bilen LV magnetotransfeksiýanyň netijeliligi döredildi, diňe LV wektory bilen deňeşdirilende geçişiň netijeliligini 186 esse ýokarlandyrdy.LV MT kistik fibrozyň in vitro modelinde hem ulanyldy, bu ýerde magnit transfeksiýa howa-suwuk interfeýs medeniýetlerinde LV geçirijiligini kistiki fibroz tüýküligi bar bolan ýagdaýynda 20 faktor ýokarlandyrdy.Şeýle-de bolsa, “vivo organ” magnetotransfeksiýa kän bir ähmiýet berilmedi we diňe haýwanlaryň gözleglerinde 11,12,13,14,15, esasanam öýkenlerde 16,17 baha berildi.Şeýle-de bolsa, kistik fibrozda öýken bejergisinde magnit transfeksiýasynyň mümkinçilikleri aýdyňdyr.Tan we ş.m.(2020) “magnitli nanobölejikleriň öýkeniň netijeli iberilmegi boýunça geçirilen barlag, kistiki fibrozly näsaglarda kliniki netijeleri gowulandyrmak üçin geljek CFTR dem alyş strategiýalaryna ýol açar” 6.
Ulanylýan magnit meýdanynyň barlygynda dem alyş ýollarynyň üstündäki ownuk magnit bölejikleriniň özüni alyp barşyny göz öňüne getirmek we öwrenmek kyn, şonuň üçin olara düşünilmeýär.Beýleki gözleglerde, gaz kanalynyň üstki gidrasiýasyny gönüden-göni ölçemek üçin 20, ASL18 çuňlugynda we MCT19 hereketinde wivo üýtgemelerinde invaziv däl şekillendiriş we minutyň mukdaryny kesgitlemek üçin Sinhrotron ýaýradyş fazasy kontrast rentgen şekillendiriş (PB-PCXI) usulyny taýýarladyk. we irki görkeziji bejerginiň netijeliligi hökmünde ulanylýar.Mundan başga-da, MCT bal usulymyz, PB-PCXI21 bilen görünýän MCT markerleri hökmünde alýuminden ýa-da ýokary refraktiw görkeziji aýnadan düzülen diametri 10–35 mkm bölejikleri ulanýar.Iki usul hem deputatlary goşmak bilen bölejikleriň bir toparyny şekillendirmek üçin amatly.
Atokary giňişlik we wagtlaýyn çözgüt sebäpli, PB-PCXI esasly ASL we MCT gözleglerimiz, MP gen gowşuryş usullaryna düşünmäge we optimizirlemäge kömek etmek üçin “vivo” -de ýeke we köp bölejikleriň dinamikasyny we özüni alyp barş usullaryny öwrenmek üçin amatlydyr.Bu ýerde ulanýan çemeleşmämiz, gözegçilik edilýän birmeňzeş gen aňlatma görnüşlerimizi düşündirmek üçin syçanlaryň burun we öýken howa ýollaryna dozaly wektoryň dozasyny gowşuranymyzdan soň suwuk hereketi göz öňüne getiren SPring-8 BL20B2 şöhlesini ulanyp, gözleglerimize esaslanýar. genimizde.göterijiniň dozasy 3.4 bolan haýwanlary öwrenmek.
Bu gözlegiň maksady, PB-PCXI sinhrotronyny diri alakalaryň trahaýasynda bir topar deputatyň wivo hereketlerini göz öňüne getirmekdi.Bu PB-PCXI şekillendiriş gözlegleri MP MP seriýasyny, magnit meýdanynyň güýjüni we MP hereketine täsirini kesgitlemek üçin döredildi.Daşarky magnit meýdany gowşurylan MF-e galmaga ýa-da maksat meýdanyna geçmäge kömek eder diýip çakladyk.Bu gözlegler, şeýle hem çökdürilenden soň trahiýada galan bölejikleriň mukdaryny köpeldýän magnit konfigurasiýalaryny kesgitlemäge mümkinçilik berdi.Gözlegleriň ikinji tapgyrynda, LV-MP-leriň howa ýollaryna nyşana alynmagy netijesinde LV-MP-leriň wivo gowşurylyşynyň netijesinde transduksiýa nagşyny görkezmek üçin bu optimal konfigurasiýany ulanmagy maksat edindik. LV geçiriş netijeliligini ýokarlandyrmakda..
Animalhli haýwanlary öwrenmek Adelaýd uniwersiteti (M-2019-060 we M-2020-022) we SPring-8 sinhrotron haýwan etikasy komiteti tarapyndan tassyklanan teswirnamalara laýyklykda geçirildi.Synaglar ARRIVE-iň tekliplerine laýyklykda geçirildi.
Xhli rentgen suratlary Japanaponiýadaky SPring-8 sinhrotronynda BL20XU şöhlesinde, ozal beýan edilenine meňzeş gurnama ulanyp alyndy.Gysgaça, synag gutusy sinhrotron saklaýyş halkasyndan 245 m uzaklykda ýerleşýär.Bölejikleri şekillendiriş gözlegleri üçin 0,6 m aralykdaky detektor aralygy, fazanyň kontrast effektlerini döretmek üçin wivo şekillendiriş gözlegleri üçin 0,3 m ulanylýar.25 kW kuwwatly monohromatiki şöhle ulanyldy.Suratlar, sCMOS detektoryna birikdirilen ýokary çözgütli rentgen geçiriji (SPring-8 BM3) ulanylyp alyndy.Geçiriji rentgen şöhlelerini 10 µm galyňlykdaky sintilýator (Gd3Al2Ga3O12) ulanyp görünýän ýagtylyga öwürýär, soňra × 10 (NA 0.3) mikroskop maksady bilen sCMOS datçigine ugrukdyrylýar.SCMOS detektory 2048 × 2048 piksel, çig piksel ölçegi 6,5 × 6.5 µm bolan Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japanaponiýa) boldy.Bu sazlama, izotrop piksel ululygy 0,51 mkm we takmynan 1,1 mm × 1,1 mm meýdany berýär.Täsiriň dowamlylygy 100 ms, dem alyş sebäpli ýüze çykýan hereket artefaktlaryny azaltmak bilen howa ýollarynyň içindäki we daşyndaky magnit bölejikleriniň signal-ses sesini ýokarlandyrmak üçin saýlandy.“Vivo” gözlegleri üçin, rentgen şöhlesini täsirleriň arasynda blokirlemek arkaly radiasiýa dozasyny çäklendirmek üçin rentgen ýoluna çalt rentgen ýapyk ýerleşdirildi.
LV media hiç bir SPring-8 PB-PCXI şekillendiriş gözleginde ulanylmady, sebäbi BL20XU şekillendiriş kamerasy Biosafety Level 2 kepillendirilmedi.Muňa derek, dürli ululyklary, materiallary, demir konsentrasiýalaryny we amaly programmalary öz içine alýan iki täjir satyjydan gowy häsiýetli deputatlary saýladyk - ilki bilen magnit meýdanlarynyň deputatlaryň aýna kapilýallarda hereketine nähili täsir edýändigine düşünmek üçin. janly howa ýollary.üstü.Deputatyň ululygy 0,25-18 mk aralygynda üýtgeýär we dürli materiallardan ýasalýar (1-nji tablisa serediň), ýöne her nusganyň düzümi, şol sanda MP-de magnit bölejikleriniň ululygy belli däl.19, 20, 21, 23, 24 giňişleýin MCT gözleglerimiziň esasynda, trahiki howa ýolunyň üstünde 5 µm çenli deputatlaryň görünmegine garaşýarys, mysal üçin, MP hereketiniň gowulaşmagyny görmek üçin yzygiderli çarçuwalary aýyrmak arkaly.0,25 mkm bir MP MP şekillendiriş enjamynyň çözgüdinden has kiçi, ýöne PB-PCXI olaryň göwrümli kontrastyny ​​we goýlandan soň goýlan ýerüsti suwuklygyň hereketini kesgitlär diýlip garaşylýar.
Tablisadaky her bir MP üçin nusgalar.1-i içki diametri 0,63 mm bolan 20 glassl aýna kapilýarlarda (Drummond Microcaps, PA, ABŞ) taýýarlandy.Korpuskulýar bölejikler suwda, CombiMag bölejikleri öndürijiniň eýeçiligindäki suwuklykda bar.Her turba ýarym suwuklyk bilen doldurylýar (takmynan 11 µl) we nusga saklaýjynyň üstünde goýulýar (1-nji surata serediň).Aýna kapilýiller şekil kamerasynda sahnada keseligine ýerleşdirilip, suwuklygyň gyralarynda ýerleşdirildi.19 mm diametri (uzynlygy 28 mm) seýrek toprakdan, neodiumdan, demirden we bordan (NdFeB) (N35, pişik. LM1652, Jaýkar Elektronik, Awstraliýa) 1,17 T berkligi bolan nikel gabykly magnit dakyldy. gazanmak üçin aýratyn geçiriş tablisasy görkezilende pozisiýaňyzy uzakdan üýtgediň.Rentgen şekillendiriş magnit nusgadan takmynan 30 mm ýokarda ýerleşende we sekuntda 4 kadrda suratlar alnanda başlaýar.Surata düşürilende, magnit aýna kapilýar turbasyna (takmynan 1 mm uzaklykda) ýakynlaşdyryldy we soňra meýdan güýjüniň we ýagdaýynyň täsirine baha bermek üçin turba boýunça hereket etdi.
Xy nusgasynyň terjime etabynda aýna kapilýarlarda MP nusgalaryny öz içine alýan in vitro şekillendiriş gurnama.Rentgen şöhlesiniň ýoly gyzyl punktir çyzyk bilen bellendi.
Deputatlaryň in vitro görnükliligi kesgitlenenden soň, olaryň bir bölegi ýabany görnüşli aýal Wistar albino alakalarynda (weeks 12 hepde, ~ 200 g) wivo görnüşinde synag edildi.Medetomidin 0,24 mg / kg (Domitor®, Zenoaq, Japanaponiýa), midazolam 3,2 mg / kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japanaponiýa) we butorfanol 4 mg / kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Alakanlar Pharma (Japanaponiýa) garyndysy bilen içerki sanjym bilen anestizasiýa edildi.Anesteziýadan soň, trahahýanyň töweregindäki sütükleri aýyrmak, endotracheal turba (ET; 16 Ga damar kannulasy, Terumo BCT) salmak we termal halta saklaýan adaty şekillendiriş plastinkasynda iň oňat ýagdaýda ýerleşdirmek arkaly surata düşmäge taýyn boldular. bedeniň gyzgynlygyny saklamak üçin.22. Soňra şekil plastinkasy, 2a-njy suratda görkezilişi ýaly, trahaýany rentgen şekilinde keseligine deňleşdirmek üçin şekil burçundaky nusga basgançagyna birneme burç bilen berkidildi.
(a) SPring-8 şekillendiriş bölüminde wivo şekillendiriş gurnamasynda, gyzyl nokatly çyzyk bilen bellenen rentgen şöhle ýoly.(b, c) Trakeal magnit lokalizasiýasy iki sany ortogona gurnalan IP kamerany ulanyp uzakdan ýerine ýetirildi.Ekrandaky şekiliň çep tarapynda, kelläni saklaýan sim halkasyny we ET turbasynyň içinde oturdylan kanulany görüp bilersiňiz.
100 µl aýna şpris ulanyp, uzakdan dolandyrylýan şpris nasos ulgamy (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 30 Ga iňňe ulanyp, PE10 turbasyna (0.61 mm OD, 0,28 mm ID) birikdirildi.Endotracheal turbany salanyňyzda, ujuň trahaýada dogry ýagdaýdadygyna göz ýetiriň.Mikropump ulanyp, şpris plunjeri aýryldy we gowşuryljak MP nusgasyna turbanyň ujy çümdürildi.Deliveryüklenen gowşuryş turbasy soň garaşylýan amaly magnit meýdanymyzyň iň güýçli bölegine ýerleşdirilip, endotracheal turba salyndy.Surat almak, Arduino esasly wagt gutusymyza birikdirilen dem detektorynyň kömegi bilen gözegçilik edildi we ähli signallar (mysal üçin, temperatura, dem alyş, ýapyk açyk / ýapyk we surat almak) Powerlab we LabChart (AD Instruments, Sidneý, Awstraliýa) arkaly ýazga alyndy. 22 Surata düşürilende Jaý elýeterli bolmadyk mahaly iki sany IP kamerasy (Panasonic BB-SC382) biri-birine takmynan 90 ° derejesinde ýerleşýärdi we surata düşürilende magnitiň trahaýa garşy ýerleşişine gözegçilik etmek üçin ulanylýar (2b surat, c).Hereket artefaktlaryny azaltmak üçin terminal dem alyş akym platosynda dem alşyna bir surat alyndy.
Magnit şekillendiriş korpusynyň daşynda uzakdan ýerleşip bilýän ikinji tapgyra birikdirildi.Magnitiň dürli pozisiýalary we konfigurasiýalary synagdan geçirildi, şol sanda: trahiýadan takmynan 30 ° burçda ýerleşdirildi (konfigurasiýalar 2a we 3a suratlarda görkezilýär);bir haýwanyň üstünde, beýlekisi bolsa aşakda, özüne çekiji polýuslar bilen (3b surat)., haýwanyň üstünde bir magnit, aşakda bolsa magnit (3c surat), ýokarda bolsa trahiýa perpendikulýar bolan bir magnit (3d surat).Haýwan we magnit gurup, MP-ni şpris nasosyna ýükläniňizden soň, suratlar alnandan soň 4 µl / sek tizlik bilen 50 µl dozany beriň.Soňra magnit şekilleri almagy dowam etdirip, trahahanyň üstünden ýa-da üstünden süýşürilýär.
Wivo şekillendiriş üçin magnit konfigurasiýasy (a) takmynan 30 ° burçda trahahanyň üstündäki bir magnit, (b) özüne çekmek üçin düzülen iki magnit, (c) yza çekmek üçin düzülen iki magnit, (d) ýokarda bir magnit we perpendikulýar trahaha.Synçy traheýanyň üsti bilen agzyndan öýkenine aşak seretdi we rentgen şöhlesi syçanyň çep tarapyndan geçip, sag tarapdan çykdy.Magnit ýa-da howa ýolunyň uzynlygy boýunça ýa-da trakeýanyň ýokarsynda rentgen şöhlesiniň ugry boýunça hereket edýär.
Şeýle hem, dem alyş we ýürek urmasy garylmadyk ýagdaýynda howa ýollaryndaky bölejikleriň görnükliligini we özüni alyp barşyny kesgitlemäge synanyşdyk.Şonuň üçin surata düşüriş döwrüniň ahyrynda pentobarbital aşa köp dozasy sebäpli haýwanlar adamlaşdyryldy (Somnopentil, Pitman-Mur, Waşington geçelgesi, ABŞ; ~ 65 mg / kg ip).Käbir haýwanlar şekillendiriş platformasynda galypdy, dem alyş we ýürek urmagy bes edilenden soň, howa ýoly üstünde hiç bir MP görünmeýän bolsa goşmaça MP dozasyny goşup, şekillendiriş prosesi gaýtalandy.
Alnan suratlar tekiz we garaňky meýdan üçin düzedildi we soňra MATLAB (R2020a, The Mathworks) -da ýazylan adaty skript ulanyp, filme (sekuntda 20 kadr; dem alyş tizligine baglylykda 15-25 × adaty tizlik) ýygnandy.
LV gen wektoryny gowşurmak boýunça ähli gözlegler Adelaýd uniwersitetiniň laboratoriýa haýwanlary öwreniş merkezinde geçirildi we magnit meýdanynyň barlygynda LV-MP gowşurylyşynyň wivo arkaly gen geçirişini güýçlendirip biljekdigini kesgitlemek üçin SPring-8 synagynyň netijelerini ulanmagy maksat edinýär. .MF we magnit meýdanynyň täsirine baha bermek üçin iki topar haýwan bejerildi: bir topara magnit ýerleşdirmek bilen LV MF sanjym edildi, beýleki topara magnitsiz LV MF gözegçilik topary bilen sanjym edildi.
LV gen wektorlary öň beýan edilen 25, 26 usullary ulanyp döredildi.LacZ wektory, öýken dokumasynyň öň we bölümlerinde görünýän transduksion öýjüklerde gök reaksiýa önümini öndürýän MPSV esaslandyryjy (LV-LacZ) tarapyndan dolandyrylýan ýadro lokallaşdyrylan beta-galaktosidaza genini aňladýar.Titrasiýa öýjük medeniýetlerinde TU / ml-de titeri hasaplamak üçin gemositometr ulanyp, LacZ-polo positiveitel öýjükleriň sanyny el bilen sanamak arkaly geçirildi.Daşaýjylar -80 ° C derejesinde saklanýar, ulanmazdan ozal ereýär we 1: 1 garyşdyryp, eltmezden azyndan 30 minut öň buzda inkubasiýa edip, CombiMag bilen baglanyşdyrylýar.
Adaty Sprague Dawley alakalary (n = 3 / topar, 0.4mg / kg medetomidiniň (Domitor, Ilium, Awstraliýa) we 1 aýlyk ýaşynda 60mg / kg ketamin (Ilium, Awstraliýa) garyndysy bilen an 2-3 anestizirlenen ip ) 16 Ga damar kannulasy bilen sanjym we hirurgiki däl agyz kannulýasiýasy.Trakeal howa ýollarynyň dokumasynyň LV transduksiýasyny almagyny üpjün etmek üçin, öň beýan edilen mehaniki perturbasiýa protokolymyz bilen şertlendirildi, onda trakeal howa ýolunyň sim sim sebedi bilen ok bilen sürtüldi (N-Circle, NTSE-022115 uçsyz nitinol daş çykaryjy) -UDH, Cook Medical, ABŞ) 30 s28.Soňra, biosfera kabinetindäki perturbasiýadan takmynan 10 minut soň LV-MP-iň trakeal administrasiýasy geçirildi.
Bu synagda ulanylýan magnit meýdany, distilýasiýa stent gysgyçlary bilen trahaýanyň üstünde saklanýan şol bir magnitli wivo rentgen barlagyna meňzeş düzüldi (4-nji surat).LV-MP-den 50 µl göwrümli (2 x 25 alik alikot) trakeýa (n = 3 haýwan) öň beýan edilişi ýaly jel görnüşli turbany ulanyp gowşuryldy.Dolandyryş topary (n = 3 haýwan) magnit ulanman şol bir LV-MP aldy.Infuziýa gutarandan soň, kanula endotracheal turbadan aýrylýar we haýwan köpelýär.Magnit aýrylmazdan ozal 10 minutlap ýerinde galýar.Alakalar meloksikam (1 ml / kg) (Ilium, Awstraliýa) bilen subkutan dozada berildi, soň bolsa atipamazol gidrokloridine (Antisedan, Zoetis, Awstraliýa) 1 mg / kg içerki sanjym arkaly anestezi yzyna aldy.Alakalar ýyly saklanýardy we anesteziýadan doly gutulýança syn edilýärdi.
Biologiki howpsuzlyk kabinetinde LV-MP gowşuryş enjamy.ET turbasynyň açyk çal Luer-gulp ýeňiniň agzyndan çykýandygyny we şekilde görkezilen jel turbasynyň ujunyň ET turbasynyň üsti bilen trahiýa islenýän çuňluga salynýandygyny görüp bilersiňiz.
LV-MP dolandyryş prosedurasyndan bir hepde soň, 100% CO2 dem almak bilen haýwanlar adamkärçilikli gurban berildi we LacZ aňlatmasy adaty X-gal bejergimiz arkaly baha berildi.Iň kaudal kıkyrtyk halkalarynyň üçüsi, endotracheal turbanyň ýerleşdirilmegi sebäpli islendik mehaniki zeper ýetmeginiň ýa-da suwuklygyň saklanmagynyň seljerme goşulmazlygy üçin aýryldy.Derňew üçin iki ýarym almak üçin her bir trahaýa uzynlygyna kesilip, lýuminal ýüzüni göz öňüne getirmek üçin Minutien iňňesini (Gözel ylym gurallary) ulanyp, silikon kauçuk (Sylgard, Dow Inc) bolan käse ýerleşdirildi.Geçirilen öýjükleriň paýlanyşy we häsiýeti, DigiLite kamerasy we TCapture programma üpjünçiligi (Tucsen Photonics, Hytaý) bilen Nikon mikroskopyny (SMZ1500) ulanyp, göni surat bilen tassyklandy.Suratlar 20x ulaldylanda (trahaýanyň doly ini üçin iň ýokary sazlamany goşmak bilen), trahahýanyň tutuş uzynlygy ädimme-ädim görkezilip, şekilleriň “tikilmegine” mümkinçilik bermek üçin her bir suratyň arasynda ýeterlik gabat geliş üpjün edildi.Soňra her trahiýadaky şekiller, planar hereket algoritmini ulanyp, “Composite Image Editor” 2.0.3 wersiýasyny (Microsoft Research) ulanyp, bir bitewi şekile birleşdirildi. Her haýwandan trakeal birleşdirilen şekilleriň içindäki LacZ aňlatma meýdany, öň düşündirilişi ýaly awtomatlaşdyrylan MATLAB skripti (R2020a, MathWorks) bilen 0,35 <Hue <0.58, doýma> 0.15 we baha <0.7 ulanylýar. Her haýwandan trakeal birleşdirilen şekilleriň içindäki LacZ aňlatma meýdany, öň düşündirilişi ýaly awtomatlaşdyrylan MATLAB skripti (R2020a, MathWorks) bilen 0,35 <Hue <0.58, doýma> 0.15 we baha <0.7 ulanylýar. Площадь Кресресии LacZ в соверных изображениях трахеи от каждого животного б б количественно определена с использованием авататизированного чимаря MATLAB (R2020a, MathWorks), как опписан , 7. Her haýwandan birleşdirilen trakeal şekillerdäki LacZ aňlatmanyň meýdany, 0.35 sazlamalaryny ulanyp, öň beýan edilişi ýaly awtomatlaşdyrylan MATLAB skripti (R2020a, MathWorks) bilen kesgitlenildi.0,15 we bahasy <0 .7.如前所述 ， 使用 AT MATLAB 脚本 20 R2020a ， MathWorks） 对 来自 每只 ac LacZ 表达 区域 使用 使用 0.35如 前所 述 ， 自动 自动 Matlab 脚本 20 202020a ， Matematika işleri IP HIP Области косрессии LacZ на соверных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием авататизированного чатыра MATLAB (R2020a, MathWorks) . Her haýwanyň trahahiniň birleşdirilen şekillerindäki LacZ aňlatma meýdanlary, ozal 0,35 <hue <0.58, doýma> 0.15 we bahasy <0.7 sazlamalary ulanyp düşündirilişi ýaly awtomatlaşdyrylan MATLAB skripti (R2020a, MathWorks) ulanylyp kesgitlenildi.GIMP v2.10.24-de dokumanyň konturlaryny yzarlamak bilen, dokumanyň meýdanyny kesgitlemek we trakeal dokumanyň daşyndaky ýalňyş tapylmalaryň öňüni almak üçin her bir birleşdirilen şekil üçin el bilen maska ​​döredildi.Her haýwandan birleşdirilen şekillerden reňklenen ýerler, şol haýwan üçin umumy reňklenen meýdany bermek üçin jemlendi.Boýalan meýdan, adaty bir ýer almak üçin maskanyň umumy meýdany bilen bölünýärdi.
Her bir trahaýa parafin içine salnyp, galyňlygy 5 µm.Bölümler 5 minutlap bitarap çalt gyzyl reňk bilen garşylandy we Nikon Eclipse E400 mikroskopy, DS-Fi3 kamerasy we NIS elementini ele almak programma üpjünçiligi (5.20.00 wersiýa) arkaly suratlar alyndy.
Allhli statistiki derňewler GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) -de geçirildi.Statistik ähmiýet p ≤ 0.05 derejesinde kesgitlenildi.Şapiro-Wilk synagyndan peýdalanyp, kadalylyk synag edildi we LacZ boýagynyň tapawudy deňleşdirilmedik t-synag arkaly baha berildi.
1-nji tablisada beýan edilen alty deputat PCXI tarapyndan gözden geçirildi we görnükliligi 2-nji tablisada beýan edildi. Iki polistirol deputaty (MP1 we MP2; degişlilikde 18 µm we 0,25 µm) PCXI tarapyndan görünmeýärdi, ýöne galan nusgalary kesgitläp bolýar (mysallar 5-nji suratda görkezilýär).MP3 we MP4 gowşak görünýär (degişlilikde 10-15% Fe3O4; degişlilikde 0,25 mk we 0,9 mk).MP5 (98% Fe3O4; 0,25 mk) synag edilen käbir ownuk bölejikleri öz içine alsa-da, iň aýdyň boldy.CombiMag MP6 önümini tapawutlandyrmak kyn.Hli ýagdaýlarda, magnit kapilýara paralel yza we yza süýşürmek arkaly MF-leri ýüze çykarmak ukybymyz ep-esli gowulaşdy.Magnitler kapilýardan daşlaşyp barýarka, bölejikler uzyn zynjyrlarda çekilipdir, ýöne magnitler ýakynlaşanda we magnit meýdanynyň güýji artdygyça bölejikler kapilýaryň ýokarky ýüzüne göçüp barýarka bölejik zynjyrlary gysgaldy (Goşmaça wideo S1 serediň) : MP4), üstündäki bölejikleriň dykyzlygyny ýokarlandyrýar.Munuň tersine, magnit kapilýardan aýrylanda meýdan güýji azalýar we deputatlar kapilýaryň ýokarky ýüzünden uzalyp gidýän uzyn zynjyrlara täzeden düzýärler (Goşmaça wideo S2: MP4 serediň).Magnit hereketini bes edensoň, bölejikler deňagramlylyga ýetenden soň belli bir wagtlap hereket etmegini dowam etdirýärler.Deputat kapilýaryň ýokarky ýüzüne tarap we daşlaşyp barýarka, magnit bölejikleri suwuklygyň üsti bilen galyndylary çekmäge ýykgyn edýär.
PCXI astynda MP-iň görnükliligi nusgalaryň arasynda ep-esli üýtgeýär.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 we (d) MP6.Bu ýerde görkezilen ähli suratlar, kapilýardan takmynan 10 mm uzaklykda ýerleşýän magnit bilen düşürildi.Görnüşi ýaly uly tegelekler, kapilýallarda gabalan howa köpürjikleri bolup, fazanyň kontrast şekiliniň ak we ak gyralaryny görkezýär.Gyzyl guty, kontrasty güýçlendirýän ulalmagy görkezýär.Figureshli sanlardaky magnit zynjyrlarynyň diametrleriniň ulalmaly däldigini we görkezilişinden takmynan 100 esse uludygyny unutmaň.
Magnit kapilýaryň ýokarsy boýunça çepe we saga hereket edende, MP setiriniň burçy magnit bilen deňleşmek üçin üýtgeýär (6-njy surata serediň), şeýlelik bilen magnit meýdan çyzyklaryny kesgitleýär.MP3-5 üçin akord bosaganyň burçuna ýetenden soň, bölejikler kapilýaryň ýokarky ýüzüne süýşýär.Bu köplenç deputatlaryň magnit meýdanynyň iň güýçli ýerinde has uly toparlara bölünmegine getirýär (Goşmaça wideo S3: MP5 serediň).Bu, esasanam, deputatyň suwuk-howa interfeýsinde jemlenmegine we jemlenmegine sebäp bolýan kapilýaryň ujuna ýakyn şekillendirilende ýüze çykýar.MP6-5-den tapawutlandyrmak has kyn bolan MP6 bölejikleri, magnit kapilýar boýunça hereket edende süýräp bilmedi, ýöne bölejikleri göz öňünde tutup, MP setirleri bölünip aýryldy (Goşmaça wideo S4: MP6 serediň).Käbir ýagdaýlarda, ulanylýan magnit meýdany magnit şekillendiriş meýdançasyndan uzak aralykda herekete getirilende azalanda, galan deputatlar setirde galyp, agyrlyk güýji bilen turbanyň aşaky ýüzüne kem-kemden inýärler (Goşmaça wideo S5: MP3 serediň) .
MP setiriniň burçy, magnit kapilýaryň ýokarsynda saga geçende üýtgeýär.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 we (d) MP6.Gyzyl guty, kontrasty güýçlendirýän ulalmagy görkezýär.Goşmaça wideolaryň bu statiki şekillerde görüp bolmaýan möhüm bölejik gurluşyny we dinamiki maglumatlary açýandygy üçin maglumat maksatlydygyny ýadyňyzdan çykarmaň.
Synaglarymyz, magnitiň trakeýa boýunça haýal we yza süýşürilmegi MF-ni “vivo” -de çylşyrymly hereket kontekstinde görmegi aňsatlaşdyrýandygyny görkezdi.Kapilýarda polistirol monjuklary (MP1 we MP2) görünmeýänligi sebäpli wivo synaglary geçirilmedi.Galan dört MF-leriň her biri, takmynan 30 ° burçda dikligine (2b we 3a suratlara serediň) magnitiň uzyn oky bilen wivo görnüşinde synag edildi, sebäbi bu MF zynjyrlarynyň has uzyn bolmagyna we has täsirli bolmagyna sebäp boldy. magnitden has köp..konfigurasiýa ýatyryldy.MP3, MP4 we MP6 haýsydyr bir janly haýwanlaryň trahaýasynda tapylmady.Haýwanlary adam öldürenden soň, syçanlaryň dem alyş ýollaryny göz öňüne getireniňizde, şpris nasosy bilen goşmaça ses goşulanda bölejikler görünmeýärdi.MP5 iň ýokary demir oksidi bolup, ýeke-täk görünýän bölejikdi, şonuň üçin MP-iň özüni alyp barşyna baha bermek we häsiýetlendirmek üçin ulanyldy.
MF goýlanda magnitiň trahaýanyň üstünde ýerleşdirilmegi, MF-leriň köpüsiniň üns merkezinde jemlenmegine sebäp boldy.Bölejikleriň trahale girmegi adamzat awtomatlaşdyrylan haýwanlarda has gowy görülýär.7-nji surat we goşmaça wideo S6: MP5 çalt magnitli tutulmagy we ventral trahahiniň üstündäki bölejikleriň deňleşmegini görkezýär, bu deputatlaryň trahaýanyň islenýän ýerlerine gönükdirilip bilinjekdigini görkezýär.MF gowşurylandan soň trahiýa boýunça has uzak gözläniňizde, käbir MF-ler karina has ýakyn tapyldy, bu bolsa ähli MF-leri ýygnamak we saklamak üçin magnit meýdanynyň ýeterlik däldigini görkezýär, sebäbi suwuklyk dolandyryşy wagtynda iň ýokary magnit meýdanynyň sebitinde gowşuryldy.prosesi.Şeýle-de bolsa, dogrumdan soňky MP konsentrasiýalary şekil meýdanynda has ýokary bolup, köp sanly deputatyň ulanylýan magnit meýdanynyň iň ýokary bolan howa ýollarynda galýandygyny görkezýär.
MP5 gowşurylandan soň we (b) suratlar ýaňy-ýakynda awtomatlaşdyrylan syçanyň trahaýasyna, şekil meýdanynyň ýokarsynda ýerleşdirilen magnit bilen.Suratlandyrylan meýdan iki sany kıkyrtyk halkanyň arasynda ýerleşýär.Deputat gowşurylmazdan ozal howa ýollarynda käbir suwuklyk bar.Gyzyl guty, kontrasty güýçlendirýän ulalmagy görkezýär.Bu suratlar S6: MP5 goşmaça wideo görkezilen wideodan alyndy.
Magnitiň trahaýa boýunça wivo bilen hereket etmegi, kapilýallarda bolşy ýaly howa ýolunyň üstündäki MP zynjyrynyň burçunyň üýtgemegine sebäp boldy (8-nji surat we goşmaça wideo S7: MP5).Şeýle-de bolsa, biziň gözlegimizde deputatlary kapilýilleriň edişi ýaly janly dem alyş ýollarynyň üstünde süýräp bolmaz.Käbir ýagdaýlarda, magnit çepe we saga hereket edende MP zynjyry uzalýar.Gyzykly tarapy, bölejik zynjyrynyň magnit trahiýa boýunça uzynlygyna süýşürilende we magnit göni üstünden süýşürilende we bölejik zynjyrynyň dikligine öwrülende suwuklygyň üstki gatlagynyň çuňlugyny üýtgedýändigini gördük. Goşmaça wideo S7).: MP5 sagat 0:09, aşakda sagda).Magnit trahýanyň ýokarsyndan (ýagny, trahýanyň uzynlygy boýunça däl-de, haýwanyň çep ýa-da saga) süýşürilende häsiýetli hereket nagşy üýtgedi.Bölejikler hereket wagtynda henizem aç-açan görünýärdi, ýöne magnit trahiýadan aýrylanda bölejik setirleriniň uçlary görünýärdi (Goşmaça wideo S8: MP5, 0:08 başlap).Bu, aýna kapilýarda ulanylýan magnit meýdanynyň täsiri astynda magnit meýdanynyň syn edilen hereketi bilen ylalaşýar.
Janly anestizirlenen syçanyň trahaýasynda MP5 görkezýän suratlar.(a) Magnit ýokarda we trahahýanyň çep tarapynda şekilleri almak üçin, soňra (b) magnitiň sag tarapyna geçirilenden soň ulanylýar.Gyzyl guty, kontrasty güýçlendirýän ulalmagy görkezýär.Bu suratlar S7′s goşmaça wideo: MP5-de görkezilen wideodandyr.
Iki polýus trahahýanyň ýokarsynda we aşagynda (ýagny özüne çekiji; 3b surat) demirgazyk-günorta ugry boýunça sazlananda, MP akkordlary has uzyn görünýärdi we trahaýanyň gyrasynda däl-de, gapdal diwarynda ýerleşýärdi. traheýa (Goşmaça serediň).Wideo S9: MP5).Şeýle-de bolsa, bir ýerdäki bölejikleriň ýokary konsentrasiýasy (ýagny, trahýanyň dykyz ýüzügi), adatça bir magnit enjamy bilen ýüze çykýan goşa magnit enjamyny ulanyp, suwuklyk kabul edilenden soň ýüze çykarylmady.Soň bolsa, garşy polýuslary yzyna gaýtarmak üçin bir magnit düzülende (3c surat), gowşurylandan soň görünýän meýdanda görünýän bölejikleriň sany köpelmedi.Iki magnit konfigurasiýasyny gurmak, magnitleri özüne çekýän ýa-da itekleýän ýokary magnit meýdany güýji sebäpli kyn.Soňra gurnama howa ýollaryna paralel bir magnit bilen üýtgedildi, ýöne howa ýollaryndan 90 dereje burçda geçdi, şonuň üçin güýç çyzyklary trakeal diwary ortogonal görnüşde geçdi (3d surat), bölejikleriň birleşmeginiň mümkinçiligini kesgitlemek üçin niýetlenen ugur; gapdal diwar.berjaý edilmelidir.Şeýle-de bolsa, bu konfigurasiýada kesgitlenýän MF ýygnamak hereketi ýa-da magnit hereketi ýokdy.Bu netijeleriň hemmesine esaslanyp, gen göterijileriň wivo gözleginde bir magnitli we 30 dereje ugrukdyryjy konfigurasiýa saýlandy (3a surat).
Haçan-da haýwan adamkärçilikli gurban edilenden soň derrew birnäçe gezek şekillendirilende, dokumanyň hereketiniň päsgel bermezligi, magnitiň terjime hereketine laýyklykda “süýşüp”, has inçe, gysga bölejik çyzyklarynyň kesgitlenip biljekdigini aňladýardy.MP6 bölejikleriniň bardygyny we hereketini aýdyň görüň.
LV-LacZ titresi 1,8 x 108 IU / mL boldy we 1: 1-ni CombiMag MP (MP6) bilen garyşdyrandan soň, haýwanlara 50 xl trakeal dozasy 9 x 107 IU / ml LV ulagy (ýagny 4.5) sanjym edildi. x 106 TU / syçan).).).Bu gözleglerde, magnit zähmet döwründe hereket etmegiň ýerine, magnit meýdanynyň ýoklugynda wektor gowşurylyşy bilen deňeşdirilende LV transduksiýasynyň (a) gowulaşyp boljakdygyny ýa-da howa ýolunyň mümkinçiligini kesgitlemek üçin magniti bir ýagdaýda kesgitledik. ünsi jemläň.Öýjükler ýokarky dem alyş ýollarynyň magnit maksatly ýerlerinde geçirilýär.
Magnitleriň bolmagy we CombiMag-yň LV wektorlary bilen bilelikde ulanylmagy, adaty LV wektor gowşuryş protokolymyz ýaly haýwanlaryň saglygyna ýaramaz täsir etmedi.Mehaniki perturbasiýa sezewar bolan trahale sebitiniň öňdäki şekilleri (Goşmaça 1-nji surat) LV-MP bejergisiniň magnitiň barlygynda transduksiýa derejesiniň ep-esli ýokarydygyny görkezdi (9a surat).Dolandyryş toparynda diňe az mukdarda gök LacZ boýagy bardy (9b surat).X-Gal reňkli kadalaşdyrylan sebitleriň mukdary, LV-MP-ni magnit meýdany bolan ýagdaýynda dolandyrmagyň takmynan 6 esse gowulaşandygyny görkezdi (9-njy surat).
Magnit meýdanynyň barlygynda we (b) magnit ýok mahaly LV-MP (a) bilen trakeal transduksiýany görkezýän birleşdirilen şekilleriň mysaly.(c) Magnit ulanmak bilen trahahiýadaky LacZ transduksiýasynyň kadalaşdyrylan meýdanynda statistiki taýdan gowulaşmak (* p = 0.029, t-test, n = 3, ortaça ± standart ýalňyşlyk).
Bitarap çalt gyzyl reňkli bölümler (Goşmaça 2-nji suratda görkezilen mysal) LacZ reňkli öýjükleriň şol bir nusgada we öň habar berlişi ýaly bir ýerde bardygyny görkezýär.
Howa ýollarynyň gen terapiýasyndaky esasy kynçylyk, gyzyklanma bildirýän ýerlerde daşaýjy bölejikleriň takyk lokalizasiýasy we howa akymynyň we işjeň mukam arassalanyşynyň barlygynda öýjükli öýkeniň ýokary geçiş netijeliligini gazanmak bolup galýar.Kistiki fibrozda dem alyş kesellerini bejermek üçin niýetlenen LV göterijiler üçin geçiriji howa ýollarynda daşaýjy bölejikleriň ýaşaýyş wagtyny köpeltmek şu wagta çenli ýetip bolmajak maksat bolupdy.Castellani we başganyň belleýşi ýaly, transduksiýany güýçlendirmek üçin magnit meýdanlarynyň ulanylmagy, elektroporasiýa ýaly beýleki gen gowşuryş usullaryndan artykmaçlyklara eýe, sebäbi ýönekeýligi, ykdysadyýeti, lokal gowşuryşy, netijeliligi ýokarlandyrmagy we inkubasiýa wagtyny gysgalaşdyryp biler.we ulagyň pes dozasy10.Şeýle-de bolsa, daşarky magnit güýçleriniň täsiri astynda howa ýollarynda magnit bölejikleriniň wivo çökdürilmegi we özüni alyp barşy hiç haçan beýan edilmedi we aslynda bu usulyň janly howa ýollarynda gen aňlatma derejesini ýokarlandyrmak ukyby wivo-de görkezilmedi.
PCXI sinhrotronynda geçirilen in vitro synaglarymyz, MP polistiroldan başga ähli synag eden bölejiklerimiziň ulanylan şekillendiriş sazlamasynda görünýändigini görkezdi.Magnit meýdanynyň barlygynda magnit meýdanlary setirleri emele getirýär, olaryň uzynlygy bölejikleriň görnüşi we magnit meýdanynyň güýji (ýagny magnitiň ýakynlygy we hereketi) bilen baglanyşyklydyr.10-njy suratda görkezilişi ýaly, her bir bölejik magnitleşip, öz ýerli magnit meýdanyna itergi berlende synlaýan setirlerimiz emele gelýär.Bu aýry meýdanlar beýleki şuňa meňzeş bölejikleriň ýerli çekiş güýçlerinden we beýleki bölejikleriň yza çekilmegi sebäpli ýerli güýçler sebäpli toparlaýyn hereketler bilen birleşmegine sebäp bolýar.
Suwuklykdan doldurylan kapilýilleriň we (c, d) howa bilen doldurylan trakeýanyň içinde emele gelýän bölejikleriň zynjyrlaryny görkezýän diagramma.Kapilýarlaryň we trahahiýanyň masştabyna çekilmändigine üns beriň.Panelde (a) zynjyrlarda ýerleşdirilen Fe3O4 bölejikleri bolan MF-iň beýany hem bar.
Magnit kapilýaryň üstünden geçende, bölejikleriň siminiň burçy Fe3O4 bolan MP3-5 üçin kritiki çäklere ýetdi, şondan soň bölejik simleri öňki ýagdaýynda galmady, üstesine täze ýere geçdi.magnit.Bu täsir, ähtimal, aýna kapilýarynyň üstü, bu hereketiň bolmagyna mümkinçilik berýän derejede tekizdir.Gyzykly tarapy, MP6 (CombiMag) beýle hereket etmedi, belki bölejikleriň has kiçi bolmagy, başga örtük ýa-da ýerüsti zarýad bolmagy ýa-da eýeçilik göterijiniň suwuklygy olaryň hereket etmek ukybyna täsir eden bolmagy mümkin.“CombiMag” bölejik şekilindäki tapawut, suwuklygyň we bölejikleriň birmeňzeş dykyzlygynyň bolup biljekdigini we şonuň üçin biri-birine aňsatlyk bilen hereket edip bilmejekdigini görkezýär.Magnit gaty çalt hereket etse, bölejikler hem ýapyşyp biler, bu bolsa magnit meýdanynyň güýjüniň suwuklykdaky bölejikleriň arasyndaky sürtülmäni elmydama ýeňip bilmejekdigini görkezýär, bu bolsa magnit meýdanynyň güýji we magnit bilen maksat meýdanynyň arasyndaky aralyk ýaly bolmaly däldigini görkezýär. geň galdyryjy.möhümdir.Bu netijeler, şeýle hem magnitleriň maksat meýdanyndan akýan köp mikropartikullary ele alyp biljekdigine garamazdan, CombiMag bölejiklerini trahaýanyň üstünde hereket etmek üçin magnitlere bil baglap bolmajakdygyny görkezýär.Şeýlelik bilen, “Vivo LV MF” barlaglary howa ýolunyň agajynyň belli ýerlerini fiziki taýdan nyşana almak üçin statiki magnit meýdanlaryny ulanmaly diýen netijä geldik.
Bölejikler bedene gowşurylandan soň, bedeniň çylşyrymly hereket edýän dokumalarynyň kontekstinde kesgitlemek kyn, ýöne magnitini trahýanyň üstünden keseligine MP setirlerini “silkmek” arkaly kesgitlemek ukyby ýokarlandy.Hakyky şekillendiriş mümkin bolsa-da, haýwan adam öldürilenden soň bölejikleriň hereketini kesgitlemek has aňsat.Magnit şekillendiriş meýdanynda ýerleşende, MP konsentrasiýalary adatça bu ýerde iň ýokarydy, ýöne käbir bölejikler köplenç trahahanyň aşagyndan tapyldy.Witro gözleglerinden tapawutlylykda, bölejikleri magnitiň hereketi bilen trahiýadan süýräp bolmaz.Bu tapyndy, trahahýanyň ýüzüni gurşap alýan mukusyň, adatça dem alýan bölejikleri gaýtadan işlemegine, mukusda duzaga düşmegine we soňundan muko-silili arassalamak mehanizminiň üsti bilen arassalanmagyna laýyk gelýär.
Trahýanyň ýokarsynda we aşagynda magnitleri çekmek üçin ulanmak (3b-nji surat), bir nokatda ýokary derejede jemlenen we bölejikleriň birmeňzeş paýlanmagyna sebäp bolup biljek magnit meýdany däl-de, has birmeňzeş magnit meýdany döredip biler diýip çakladyk..Şeýle-de bolsa, deslapky gözlegimiz bu çaklamany tassyklaýan anyk subutnama tapmady.Edil şonuň ýaly-da, bir jübüt magnit goýmak (3-nji surat) şekil meýdanynda bölejikleriň has köp ýerleşmegine getirmedi.Bu iki tapyndy, goşa magnitli sazlamanyň MP görkezýän ýerli gözegçiligini ep-esli gowulaşdyrmaýandygyny we netijede güýçli magnit güýçlerini sazlamagyň kyndygyny görkezýär, bu çemeleşmäni has amatly edýär.Şonuň ýaly-da, magnitiň ýokarsyna we trahýanyň üstünden gönükdirilmegi (3d surat) şekillendirilen ýerde galan bölejikleriň sanyny artdyrmady.Bu alternatiw konfigurasiýalaryň käbiri üstünlikli bolup bilmez, sebäbi çöketlik zonasyndaky magnit meýdanynyň güýji azalýar.Şeýlelik bilen, 30 dereje ýeke magnit konfigurasiýasy (3a surat) wivo synag usulynda iň ýönekeý we iň täsirli hasaplanýar.
LV-MP gözleginde, LV wektorlary CombiMag bilen birleşdirilip, magnit meýdanynyň barlygynda fiziki taýdan biynjalyk bolandan soň gowşurylandan soň, gözegçilik bilen deňeşdirilende trahiýada transduksiýa derejesi ep-esli ýokarlandy.Sinhrotron şekillendiriş gözleglerine we LacZ netijelerine esaslanyp, magnit meýdany trahiýada LV-ni saklap we öýkeniň içine derrew giren wektor bölejikleriniň sanyny azaldyp bilýän ýalydy.Şeýle maksatly gowulaşmalar, gowşurylan titrleri, nyşana alynmadyk transduksiýany, çişme we immun täsirlerini we gen geçirmek çykdajylaryny azaltmak bilen has ýokary netijelilige sebäp bolup biler.Möhüm zat, öndürijiniň pikiriçe, CombiMag beýleki gen geçiriş usullary, şol sanda beýleki wirus wektorlary (AAV) we nuklein kislotalar bilen bilelikde ulanylyp bilner.