Nature.com-a gireniňiz üçin sag boluň.Ulanylýan brauzer wersiýaňyzyň çäkli CSS goldawy bar.Iň oňat tejribe üçin täzelenen brauzeri ulanmagy maslahat berýäris (ýa-da Internet Explorer-de Gabat geliş tertibini öçüriň).Şol aralykda, dowamly goldawy üpjün etmek üçin sahypany stil we JavaScript bolmazdan hödürläris.
Toksoplazma gondii ýokaşan öýjügiň mikro-gurşawyny modullaýan we öýjükli protozoan parazit bolup, beýniniň çişiniň ösmegi bilen baglanyşyklydygy mälimdir.Bu gözlegde, Toksoplazma ýokançlygyndan ekzosomal miRNA-21 beýniniň çişiniň ösmegine kömek edýär diýip çaklaýarys.Toksoplazma ýokaşan BV2 mikroglýasynyň ekzozomlary häsiýetlendirildi we U87 glioma öýjükleriniň içkileşmegi tassyklandy.Ekzosomal mikroRNA aňlatma profilleri, Toksoplazma gondii we çişleri sortlamak bilen baglanyşykly mikroRNA we mikroRNA-21A-5p massiwleri arkaly derňeldi.Şeýle hem, U87 glioma öýjüklerindäki çiş bilen baglanyşykly genleriň mRNA derejesini, ekzozomlarda miR-21 derejesini we ekzozomlaryň adam U87 glioma öýjükleriniň köpelmegine edýän täsirini derňedik.Toksoplazma gondii bilen ýokaşan U87 glioma öýjükleriniň ekzozomlarynda mikroRNA-21 görnüşi ýokarlanýar we antitora garşy genleriň (FoxO1, PTEN we PDCD4) işjeňligi azalýar.Toksoplazma ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlar U87 glioma öýjükleriniň köpelmegine sebäp bolýar.Ekzozomlar, syçanjygyň çiş modelinde U87 öýjükleriniň ösmegine itergi berýär.Toksoplazma ýokaşan BV2 mikroglýasynda ekzosomal miR-21-iň köpelmegi, antitumor genlerini kadalaşdyrmak arkaly U87 glioma öýjüklerinde öýjükleriň ösmeginde möhüm rol oýnap biler.
Hasaplamalara görä, 2018-nji ýylda dünýäde 18,1 milliondan gowrak ösen rak keseli ýüze çykaryldy we her ýyl takmynan 297,000 merkezi nerw ulgamynyň çişleri anyklandy (ähli çişleriň 1,6%) 1.Öňki gözlegler, adamyň beýni çişleriniň döremegi üçin töwekgelçilik faktorlarynyň arasynda dürli himiki önümleri, maşgala taryhyny we baş bejeriş we anyklaýyş enjamlaryndan ionlaşdyryjy şöhlelenmäni öz içine alýandygyny görkezdi.Şeýle-de bolsa, bu näsazlyklaryň takyk sebäbi belli däl.Dünýädäki ähli rak keselleriniň takmynan 20% -i wiruslar, bakteriýalar we parazitler ýaly ýokanç serişdeler sebäpli ýüze çykýar3,4.Fectokanç patogenler, öýjügiň DNK bejergisi we öýjük sikli ýaly genetiki mehanizmlerini bozýar we dowamly çişmä we immunitetiň zaýalanmagyna sebäp bolup biler5.
Adamyň düwnük keseli bilen baglanyşykly ýokanç serişdeler, adam papillomawiruslary we gepatit B we C wiruslaryny öz içine alýan iň köp ýaýran wirus patogenleridir.Parazitler adam düwnük keseliniň ösmeginde hem möhüm rol oýnap biler.Birnäçe parazit görnüşi, ýagny Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis we Hymenolepis nana, adam düwnük keseliniň dürli görnüşlerine 6,7,8 degişlidir.
Toksoplazma gondii ýokaşan öýjükleriň mikro-gurşawyny kadalaşdyrýan öýjükli protozoan.Bu parazit, dünýä ilatynyň takmynan 30% -ine ýokaşýar we tutuş ilaty 9,10 töwekgelçilige salýar.Toksoplazma gondii merkezi nerw ulgamyny (CNS) öz içine alýan möhüm organlara ýokaşyp biler we ölüm howply meningit we ensefalit ýaly çynlakaý keselleri döredip biler, esasanam immuniteti ýok hassalarda9.Şeýle-de bolsa, “Toksoplazma gondii” immuniteti ýok adamlarda öýjükleriň ösüşini we immun täsirini modulirlemek bilen ýokaşan öý eýesiniň daşky gurşawyny üýtgedip biler, bu asimptomatiki hroniki ýokançlygyň saklanmagyna sebäp bolar9,11.Gyzykly tarapy, T. gondii ýaýramagy bilen beýni çiş keseliniň arasyndaky baglanyşygy göz öňünde tutup, käbir habarlarda dowamly T. gondi infeksiýasy sebäpli “vivo” -de daşky gurşawyň üýtgemeginiň çişiň mikro-gurşawyna meňzeýändigi aýdylýar.
Ekzozomlar, goňşy öýjüklerden beloklary we nuklein kislotalary goşmak bilen biologiki mazmuny berýän öýjükli aragatnaşykçylar hökmünde bellidir16,17.Ekzozomlar, çişiň mikro-gurşawynda anti-apoptoz, angiogenez we metastaz ýaly çiş bilen baglanyşykly biologiki proseslere täsir edip biler.Hususan-da, uzynlygy 22 nukleotid bolan kiçi kodlanmadyk RNK, miRNA-lar (miRNAs), transkripsiýadan soňky gen düzgünleşdirijileridir, miRNA bilen öçürilen ümsümlik toplumy (miRISC) arkaly adam mRNA-nyň 30% -den gowragyny dolandyrýar.Toksoplazma gondi ýokaşan öýlerde miRNA aňlatmasyna gözegçilik edip biologiki amallary bozup biler.Hoster eýesi miRNA-larda parazitiň diri galmak strategiýasyna ýetmek üçin ýer eýesi biologiki amallary kadalaşdyrmak üçin möhüm signallar bar.Şeýlelik bilen, T. gondii ýokaşandan soň, öý eýesi miRNA profilindäki üýtgeşmeleri öwrenmek, öý eýesi bilen T. gondii arasyndaky özara gatnaşyga has aýdyň düşünmäge kömek edip biler.Hakykatdanam, Thirugnanam we başgalar.15 T. gondii, çişiň ösmegi bilen baglanyşykly belli bir miRNA-larda aňlatmasyny üýtgedip, beýniniň kanserogenezini ösdürýändigini öňe sürdi we T. gondii synag haýwanlarynda gliomalara sebäp bolup biljekdigini anyklady.
Bu gözleg, Toksoplazma BV2 ýokaşan mikroglýada ekzosomal miR-21 üýtgemegine ünsi jemleýär.Üýtgedilen ekzosomal miR-21-iň aşa aşa gysylan miR-21 nyşany bolan FoxO1 / p27 ýadrosynda saklanmagy sebäpli U87 glioma öýjükleriniň ösmeginde bolup biljek roluna syn etdik.
BV2-den alnan ekzozomlar diferensial merkezden gaçyryş usuly bilen alyndy we öýjükli komponentler ýa-da beýleki wezikulalar bilen hapalanmagyň öňüni almak üçin dürli usullar bilen tassyklandy.SDS-poliakrilamid gel elektroforezi (SDS-PAGE) BV2 öýjüklerinden we ekzozomlardan alnan beloklaryň arasynda tapawutly nagyşlary görkezdi (1A surat), we ekzosomal belok bellikleriniň günbatar partlamasy bilen seljerilen Alix-iň barlygy üçin nusgalar bahalandyryldy.Alix belligi ekzosoma beloklarynda tapyldy, ýöne BV2 öýjükli lizat beloklarynda däl (1-nji surat).Mundan başga-da, BV2-den alnan ekzozomlardan arassalanan RNK bioanalizator arkaly derňeldi.18S we 28S ribosomal subunitler, ekzosomal RNK göçüriş nusgasynda seýrek gabat gelýärdi, bu ygtybarly arassalygy görkezýär (1C surat).Netijede, elektron mikroskopiýa gözegçilik edilýän ekzozomlaryň takmynan 60–150 nm uludygyny we ekzosoma morfologiýasyna mahsus käse meňzeş gurluşyň bardygyny görkezdi (1D-nji surat).
BV2 öýjüklerinden alnan ekzozomlaryň häsiýetnamasy.(A) Howpsuzlyk maglumatlary sahypasy.Beloklar BV2 öýjüklerinden ýa-da BV2-den alnan ekzozomlardan izolirlenipdir.Belok nagyşlary öýjükler bilen ekzozomlaryň arasynda tapawutlanýar.(B) Ekzosomal markeriň (Alix) günbatar blot derňewi.(C) Bio2 analizator arkaly BV2 öýjüklerinden we BV2 alnan ekzozomlardan arassalanan RNK-a baha bermek.Şeýlelik bilen, BV2 öýjüklerindäki 18S we 28S ribosomal subunitler ekzosomal RNK-da seýrek tapyldy.(D) Geçiriş elektron mikroskopiýasy, BV2 öýjüklerinden izolirlenen ekzozomlaryň 2% uranil asetat bilen negatiw reňklenendigini görkezdi.Ekzozomlar takmynan 60-150 nm ululykda we käse şekilli (Aýdym we ungung, çap edilmedik maglumatlar).
B82-den alnan ekzozomlaryň U87 adam glioma öýjüklerine öýjükli içerki görnüşi konokok mikroskopiýa arkaly syn edildi.PKH26 belgili ekzozomlar U87 öýjükleriniň sitoplazmasynda lokallaşdyrylýar.Nuclei DAPI (2A-njy surat) bilen boýaldy, bu BV2-den alnan ekzozomlaryň öýjükler tarapyndan içerkilaşdyrylyp, kabul ediji öýjükleriň gurşawyna täsir edip biljekdigini görkezýär.
B82-den alnan ekzozomlaryň U87 glioma öýjüklerine we Toksoplazma RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlaryň U87 glioma öýjükleriniň köpelmegine sebäp boldy.(A) Konokok mikroskopiýa bilen ölçenen U87 öýjükleri bilen gurşalan ekzozomlar.U87 glioma öýjükleri PKH26 (gyzyl) belgili ýa-da 24 sagat gözegçiliksiz ekzozomlar bilen inkubasiýa edildi.Nucadrolar DAPI (gök) bilen reňklenip, soňra konokok mikroskopda (masştab çyzgysy: 10 μm, x 3000) syn edildi.(B) U87 glioma öýjükleriniň köpelmegi öýjükleriň köpelmegi barlagy bilen kesgitlenildi.U87 glioma öýjükleri görkezilen wagt üçin ekzozomlar bilen bejerildi. * P <0.05 Talyp synagy arkaly alyndy. * P <0.05 Talyp synagy arkaly alyndy. * P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. * P <0.05 Talyp synagy bilen. * P <0.05 通过 学生 t 检验 获得。 * P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 Talyp synagyndan peýdalanyp alyndy.
BV2-den alnan ekzozomlaryň U87 glioma öýjüklerine içkileşdirilendigini tassyklandan soň, BV2-den alnan Toksoplazma-ekzozomlaryň adam glioma öýjükleriniň ösüşindäki roluny öwrenmek üçin öýjükleriň köpelmegi baradaky barlaglary etdik.U87 öýjüklerini T. gondii ýokaşan BV2 öýjüklerinden ekzozomlar bilen bejermek, T. gondi bilen ýokaşan BV2 ekzozomlarynyň gözegçilik bilen deňeşdirilende U87 öýjükleriniň ep-esli köpelmegine sebäp bolandygyny görkezdi (2-nji surat).
Mundan başga-da, U118 öýjükleriniň ösüşi U87 bilen deň netijelere eýe boldy, sebäbi Toksoplazma stimulirlenen ekzozomlar iň ýokary ýaýramagyna sebäp boldy (maglumatlar görkezilmeýär).Bu maglumatlara esaslanyp, BV2-den alnan Toksoplazma ýokaşan ekzozomlaryň glioma öýjükleriniň köpelmeginde möhüm rol oýnaýandygyny görkezip bileris.
Toksoplazma ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlaryň çişiň ösüşine edýän täsirini öwrenmek üçin, ksenograft modeli üçin U87 glioma öýjüklerini ýalaňaç syçanlara sanjym etdik we BV2-den alnan ekzozomlara ýa-da RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlara sanjym etdik.Çişler 1 hepdeden soň ýüze çykandan soň, 5 başlangyç syçanjygyň her bir synag topary şol bir başlangyç nokady kesgitlemek üçin çişiň ululygyna görä bölünip, çişiň ululygy 22 gün ölçenildi.
U87 ksenograft modeli bolan syçanlarda, 22-nji gün BV2-den alnan RH ýokaşan ekzozom toparynda ep-esli uly çiş ululygy we agramy hasaba alyndy (3A, B surat).Beýleki tarapdan, BV2-den alnan ekzozom topary bilen ekzosome bejergisinden soň gözegçilik toparynyň arasynda çiş ululygynda düýpli tapawut ýokdy.Mundan başga-da, glioma öýjükleri we ekzozomlar bilen sanjym edilen syçanlar, RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlar toparyndaky iň uly çiş mukdaryny wizual görkezýär (3-nji surat).Bu netijeler, BV2-den alnan Toksoplazma ýokaşan ekzozomlaryň, syçanyň çiş modelinde gliomanyň ösmegine itergi berýändigini görkezýär.
U87 ksenograft syçan modelinde BV2-den alnan ekzozomlaryň onkogenezi (AC).BV2-den alnan RH ýokaşan ekzozomlar bilen bejerilen BALB / c ýalaňaç syçanlarda çişiň ululygy (A) we agramy (B) ep-esli ýokarlandy.BALB / c ýalaňaç syçanlar (C) Matrigel garyndysynda saklanan 1 x 107 U87 öýjükleri bilen subkutan sanjym edildi.Sanjymdan alty gün soň, syçanlarda 100 μg BV2-den alnan ekzozomlar bejerildi.Çişiň ululygy we agramy görkezilen günlerde we gurbanlykdan soň ölçeldi. * P <0.05. * P <0.05. * Р <0,05. * P <0.05. * P <0.05。 * P <0.05。 * Р <0,05. * P <0.05.
Maglumatlar, immunitet ýa-da çişiň ösmegi bilen baglanyşykly 37 miRNA-nyň (16 aşa aşa gysylan we 21 peselýän) Toksoplazma RH ştammyna ýokaşandan soň mikroglýada ep-esli üýtgändigini görkezdi (4A-njy surat).Üýtgedilen miRNA-laryň arasynda miR-21 deňeşdirme derejesi BV2-den alnan ekzozomlarda, BV2 we U87 öýjükleri bilen bejerilen ekzozomlarda real wagt RT-PCR tarapyndan tassyklandy.MiR-21-iň beýany, Toksoplazma gondi (RH ştammy) bilen ýokaşan BV2 öýjüklerinden ekzozomlaryň ep-esli artandygyny görkezdi (4B-nji surat).BV2 we U87 öýjüklerinde miR-21-iň aňlatma derejesi üýtgedilen ekzozomlar kabul edilenden soň ýokarlandy (4B-nji surat).Toksoplazma gondii (ME49 ştammy) bilen ýokaşan çiş näsaglarynyň we syçanlaryň beýni dokumalarynda miR-21 aňlatma derejesi degişlilikde gözegçilikden has ýokarydy (4C-nji surat).Bu netijeler, vitro we vivo-de çak edilýän we tassyklanan mikroRNA-laryň aňlatma derejeleriniň arasyndaky tapawutlar bilen baglanyşdyrylýar.
Toksoplazma gondii (RH) bilen ýokaşan mikroglýada ekzosomal miP-21a-5p görnüşiniň üýtgemegi.(A) T. gondii RH ýokançlygyndan soň immunitet ýa-da çişiň ösmegi bilen baglanyşykly siRNA-da düýpli üýtgeşmeleri görkezýär.(B) Deňeşdirilen miR-21 aňlatma derejeleri, real wagt RT-PCR tarapyndan BV2-den alnan ekzozomlarda, BV2 bejergisi we U87 öýjüklerinde ýüze çykaryldy.. * P <0.05 Talyp synagy arkaly alyndy. * P <0.05 Talyp synagy arkaly alyndy. * P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 Talyp synagyndan peýdalanyp alyndy. * P <0.05 通过 学生 t 检验 获得。 * P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 Talyp synagyndan peýdalanyp alyndy.
RH ýokaşan BV2 öýjüklerinden alynýan netijeler, wivo we in vitroda gliomalaryň ösmegine sebäp boldy (2-nji surat).Degişli mRNA-lary anyklamak üçin, BV2 ýa-da RH BV2-den alnan ekzozomlar bilen ýokaşan U87 öýjüklerinde öýjükli ölüm O4 (FoxO1), PTEN we programmirlenen öýjük ölümi 4 (PDCD4) mRNA derejesini gözden geçirdik.Bioinformatika derňewi, FoxO1, PTEN we PDCD4 genleri ýaly birnäçe çiş bilen baglanyşykly genleriň miR-2121,22 baglanyşyk ýerleriniň bardygyny görkezdi.RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlarda, BV2-den alnan ekzozomlar bilen deňeşdirilende, antitora garşy genleriň mRNA derejesi azaldy (5A-njy surat).FoxO1, RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlarda BV2-den alnan ekzozomlarda belok derejesiniň azalandygyny görkezdi (5B surat).Bu netijelere esaslanyp, RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlaryň, çişiň ösmeginde roluny saklap, onkogen genleri kadalaşdyrýandygyny tassyklap bileris.
Toksoplazma RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlar, U87 glioma öýjüklerinde antitumor genleriniň Toksoplazma RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlar tarapyndan basylmagyna sebäp bolýar.(A) FoxO1, PTEN we PDCD4 real wagt PCR, T. gondii RH ýokaşan BV2-den alnan ekzozomlarda, PBS ekzozomlary bilen deňeşdirilende.gözegçilik hökmünde β-aktin mRNA ulanyldy.(B) FoxO1 aňlatmasy Günbatar blotirlemesi bilen kesgitlenildi we ImageJ programmasy arkaly densitometriýa maglumatlary statistik taýdan baha berildi. * P <0.05 Talyp synagy arkaly alyndy. * P <0.05 Talyp synagy arkaly alyndy. * P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 Talyp synagyndan peýdalanyp alyndy. * P <0.05 通过 学生 t 检验 获得。 * P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 Talyp synagyndan peýdalanyp alyndy.
MiP-21-iň ekzozomlarda çiş bilen baglanyşykly gen kadalaşdyrylyşyna täsirine düşünmek üçin U87 öýjükleri Lipofektamin 2000 ulanyp, miP-21 inhibitory bilen transfeksiýa edildi we öýjükler transfeksiýadan 24 sagat soň ýygnaldy.MiR-21 ingibitorlary bilen ýokaşan öýjüklerdäki FoxO1 we p27 aňlatma derejeleri, qRT-PCR ulanyp BV2-den alnan ekzozomlar bilen bejerilen öýjükler bilen deňeşdirildi (6A, B surat).MiR-21 inhibitorynyň U87 öýjüklerine geçirilmegi FoxO1 we p27 aňlatmasyny ep-esli derejede kadalaşdyrdy (FIG. 6).
RH ýokaşan ekzosomal BV2-den alnan miP-21 U87 glioma öýjüklerinde FoxO1 / p27 aňlatmasyny üýtgetdi.U87 öýjükleri Lipofektamin 2000 ulanyp, miP-21 inhibitory bilen ýokaşdy we öýjükler transfeksiýadan 24 sagat soň ýygnaldy.MiR-21 ingibitorlary bilen ýokaşan öýjüklerdäki FoxO1 we p27 aňlatma derejeleri, qRT-PCR (A, B) ulanyp, BV2-den alnan ekzozomlar bilen bejerilen öýjüklerdäki derejeler bilen deňeşdirildi.
Öý eýesiniň immunitetinden gutulmak üçin Toksoplazma paraziti dokuma kistasyna öwrülýär.Olar öý eýesiniň ömrüniň dowamynda beýni, ýürek we skelet myşsalaryny öz içine alýan dürli dokumalary parazitleşdirýärler we öý eýesiniň immunitetini modullaşdyrýarlar.Mundan başga-da, öýjük siklini we öýjükleriň apoptozyny kadalaşdyryp, olaryň köpelmegine kömek edip bilerler14,24.Toksoplazma gondii esasan öýjükli dendrit öýjüklerine, neýtrofillere we monosit / makrofag nesiline, şol sanda beýni mikroglýasyna ýokaşýar.Toksoplazma gondii M2 fenotipiniň makrofaglarynyň tapawutlanmagyna sebäp bolýar, patogen ýokançlygyndan soň ýaranyň bejergisine täsir edýär, şeýle hem giperwaskulyarizasiýa we granulomatoz fibroz bilen baglanyşyklydyr.Toksoplazma ýokançlygynyň bu özüni alyp baryş patogenezi, çişiň ösmegi bilen baglanyşykly bellikler bilen baglanyşykly bolup biler.Toksoplazma bilen düzgünleşdirilýän duşmançylyk gurşawy degişli deslapky adama meňzeýär.Şonuň üçin Toksoplazma ýokançlygynyň beýni çişleriniň ösmegine goşant goşmalydygyny çaklamak bolar.Aslynda, dürli beýni çişleri bolan näsaglaryň seriýasynda Toksoplazma ýokançlygynyň ýokary derejesi habar berildi.Mundan başga-da, Toksoplazma gondii başga bir kanserogen täsir ediji bolup biler we beýleki ýokanç kanserogenlere beýni çişleriniň ösmegine kömek etmek üçin sinergistik hereket edip biler.Bu nukdaýnazardan P. falciparum we Epstein-Barr wirusynyň Burkittiň lenfomasynyň döremegine sinergistik goşant goşýandygyny bellemelidiris.
Düwnük keselini öwrenmekde ekzozomlaryň sazlaýjy hökmünde tutýan orny giňden öwrenildi.Şeýle-de bolsa, parazitler bilen ýokaşan öý eýeleriniň arasyndaky ekzozomlaryň roly gaty gowy düşünilmän galýar.Şu wagta çenli dürli kadalaşdyryjylar, şol sanda gizlin beloklar, protozoan parazitleriň öý hüjümine garşy durmagy we ýokançlygy dowam etdirmegi bilen biologiki amallary düşündirdi.Soňky döwürde protozoan bilen baglanyşykly mikro mikrosikullar we olaryň mikroRNA-lary öý öýjükleri bilen täsirleşip, ýaşamaklary üçin amatly şert döredýär diýen düşünje bar.Şonuň üçin üýtgedilen ekzosomal miRNA bilen glioma öýjükleriniň köpelmeginiň arasyndaky baglanyşygy ýüze çykarmak üçin goşmaça barlaglar zerurdyr.MikroRNA üýtgemegi (klaster genleri miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 we miR-17-92) toksoplazma ýokaşan adam makrofaglarynda STAT3 öňe sürijisi bilen baglanyşdyrylýar, kadalaşdyrylýar we anti-garşy çykýar; -Toksoplazma gondi infeksiýasyna jogap hökmünde 29.Toksoplazma ýokançlygy, birnäçe giperproliferatiw keseller bilen baglanyşykly miR-17-5p we miR-106b-5p täsirini ýokarlandyrýar.Bu maglumatlar, Toksoplazma ýokançlygy bilen kadalaşdyrylýan miRNA-laryň parazitleriň ýaşamagy we biologiki özüni alyp barşynda patogenez üçin möhüm molekulalardygyny görkezýär.
Üýtgedilen miRNA-lar, gliomalary öz içine alýan zyýanly öýjükleriň başlangyjy we ösüşi wagtynda dürli hereketlere täsir edip biler: ösüş signallarynyň öz-özüne ýeterlik bolmagy, ösüşi saklaýan signallara duýgurlyk, apoptozdan gaçmak, çäklendirilmedik köpeltmek mümkinçiligi, angiogenez, çozuş we metastaz we çişme.Gliomada üýtgedilen miRNA-lar birnäçe aňlatma profilli gözleglerde ýüze çykaryldy.
Häzirki gözlegde, toksoplazma ýokaşan öýjüklerde miRNA-21 aňlatmasynyň ýokary derejesini tassykladyk.miR-21, 33 ýaşly glioma ýaly gaty çişlerde iň ýygy-ýygydan aşa gysylan mikroRNA-laryň biri hökmünde kesgitlenildi we onuň beýany glioma derejesi bilen baglanyşdyrylýar.Evidenceygnalan subutnamalar, miR-21-iň gliomanyň ösmeginde anti-apoptotik faktor hökmünde hereket edýän we adam beýnisiniň näsazlyklarynyň dokumalarynda we plazmasynda aşa aşa gysylan täze onkogenidigini görkezýär.Glioma öýjüklerinde we dokumalarynda miR-21 hereketsiz bolmagy, kasasa bagly apoptoz sebäpli öýjükleriň köpelmeginiň öňüni alýar.MiR-21 çak edilýän nyşanlaryň bioinformatiki seljermesi, miR-2121 baglanyşyk meýdançasy bilen programmirlenen öýjük ölümi 4 (PDCD4), tropomiýozin (TPM1), PTEN we forma kellesi O1 (FoxO1) ýaly apoptoz ýollary bilen baglanyşykly birnäçe çiş ýok ediji genleri ýüze çykardy..22.38.
FoxO1, transkripsiýa faktorlarynyň biri hökmünde (FoxO) adam düwnük keseliniň dürli görnüşleriniň ösmegine gatnaşýar we p21, p27, Bim we FasL40 ýaly çiş ýok ediji genleriň aňladylyşyny sazlap bilýär.FoxO1, öýjükleriň ösüşini basyp ýatyrmak üçin p27 ýaly öýjük sikliniň ingibitorlaryny baglanyşdyryp we işjeňleşdirip biler.Mundan başga-da, FoxO1 PI3K / Akt duýduryşynyň esasy täsir edijisidir we p2742 transkripsiýasyny işjeňleşdirmek arkaly öýjük sikliniň ösüşi we öýjükleriň tapawudy ýaly köp biologiki amallary kadalaşdyrýar.
Sözümiziň ahyrynda, Toksoplazma ýokaşan mikroglýadan alnan ekzosomal miR-21, glioma öýjükleriniň ösüşini sazlaýjy hökmünde möhüm rol oýnap biljekdigine ynanýarys (7-nji surat).Şeýle-de bolsa, ekzosomal miR-21, üýtgän Toksoplazma ýokançlygy we gliomanyň ösmegi arasynda göni baglanyşyk tapmak üçin goşmaça barlaglar zerurdyr.Bu netijeleriň Toksoplazma ýokançlygy bilen glioma keseliniň arasyndaky baglanyşygy öwrenmek üçin başlangyç nokat bolmagyna garaşylýar.
Bu gözlegde glioma (beýni) kanserogenez mehanizminiň shemasy teklip edilýär.Authorazyjy PowerPoint 2019-da çyzýar (Microsoft, Redmond, WA).
Bu gözlegde haýwanlary ulanmak ýaly ähli synag teswirnamalary Seul Milli Uniwersitetiniň Haýwanlara ideg we Ulanyjy komitetiniň standart etiki görkezmelerine laýyk geldi we Seul milli uniwersitet lukmançylyk mekdebiniň institusional syn geňeşi (IRB belgisi SNU- 150715).-2).Synag amallarynyň hemmesi ARRIVE tekliplerine laýyklykda geçirildi.
BV2 syçanjygyň mikrogliýasy we U87 adam glioma öýjükleri Dulbecco-nyň Üýtgedilen bürgüdi ortaça (DMEM; Welgene, Seul, Koreýa) we Roswell Park Memorial institutynyň orta (RPMI; Welgene) degişlilikde 10% düwünçegiň irini, 4 mM l- glutamin, 0,2 m penisillin we 0,05 m streptomisin.Öýjükler 37 ° C-de 5% CO2 bolan inkubatorda ösdürilip ýetişdirildi.U87 öýjükleri bilen deňeşdirmek üçin başga bir glioma öýjük çyzygy U118 ulanyldy.
T. gondii ýokaşan RH we ME49 ştamlaryndan ekzozomlary izolirlemek üçin T. gondii tahizoitler (RH ştammy) 3-4 gün öň sanjym edilen 6 hepdelik BALB / c syçanlaryň garyn boşlugyndan ýygnaldy.Täçizoitler PBS bilen üç gezek ýuwuldy we 40% Perkollda (Sigma-Aldrih, Sent-Luis, MO, ABŞ) 43 sentrifugasiýa bilen arassalandy.ME49 ştammynyň takizoitlerini almak üçin BALB / c syçanlar içerde 20 dokuma kistasy bilen sanjym edildi we ýokançlykdan (PI) 6-8-nji günde garyn boşlugyny ýuwmak arkaly kistalarda taxizoit öwrülişigi ýygnaldy.PBS ýokaşan syçanlar.ME49 tahizoitler 100 μg / ml penisillin (Gibco / BRL, Grand Island, NY, ABŞ), 100 μg / ml streptomisin (Gibco / BRL) we 5% düwünçegiň irin (Lonza, Walkersville, MD) bilen doldurylan öýjüklerde ösdürilip ýetişdirildi. .., ABŞ) 37 ° C we 5% kömürturşy gazy.Wero öýjüklerinde ösdürilip ýetişdirilenden soň, ME49 tahizoitler 25 ölçegli iňňeden iki gezek, galyndylary we öýjükleri aýyrmak üçin 5 µm süzgüçden geçdi.Hinguwlandan soň, tahizitler PBS44-de gaýtadan ýerleşdirildi.Toksoplazma gondii ştammynyň dokma kistalary ýokaşan C57BL / 6 syçanlaryň beýnisinden izolirlenen kistleriň içerki sanjymy bilen saklandy (Gündogar Bio Haýwanlar Merkezi, Seongnam, Koreýa).ME49 ýokaşan syçanlaryň beýnisi 3 aýlyk PI-den soň ýygnaldy we kistalary izolirlemek üçin mikroskop astynda kesildi.Infectedokaşan syçanlar Seulyň Milli uniwersitetiniň lukmançylyk mekdebinde ýörite patogen şertlerinde (SPF) saklandy.
Jemi RNA, öndürijiniň görkezmesine laýyklykda, elitasiýa ädiminiň inkubasiýa wagtyny goşmak bilen, miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germaniýa) ulanyp, BV2-den alnan ekzozomlardan, BV2 öýjüklerinden we dokumalaryndan alyndy.RNK konsentrasiýasy NanoDrop 2000 spektrofotometrde kesgitlenildi.RNK mikroarraýlarynyň hiline Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Gollandiýa) ulanylyp baha berildi.
10% ekzozom-garyp FBS bolan DMEM 100,000g derejesinde 4 ° C-de 16 sagatlap ultramelewşe bilen taýýarlandy we 0,22 mkm süzgüç arkaly süzüldi (Nalgene, Roçester, NY, ABŞ).BV2 öýjükleri, 5 × 105, DMEM-de 10% ekzozomyň tükenen FBS we 37 ° C we 5% CO2 derejesinde 1% antibiotikleri öz içine alýan medeniýete eýe boldy.24 sagatlap inkubasiýa edilenden soň, öýjüklere RH ýa-da ME49 (MOI = 10) ştammynyň takizoitleri goşuldy we hüjüm etmeýän parazitler bir sagadyň içinde aýryldy we DMEM bilen dolduryldy.BV2 öýjüklerinden alnan ekzozomlar, iň giňden ulanylýan usul, üýtgedilen diferensial sentrifugasiýa bilen izolirlendi.RNK ýa-da belok derňewi üçin ekzozom bölejigini 300 µl PBS-de gaýtadan ulanyň.Izolirlenen ekzozomlaryň konsentrasiýasy BCA belok analiz toplumy (Pirs, Rokford, IL, ABŞ) we NanoDrop 2000 spektrofotometr arkaly kesgitlenildi.
BV2 öýjüklerinden çökündiler ýa-da BV2-den alnan ekzozomlar PRO-PREP ™ belok çykarmak ergininde (iNtRon Biotehnologiýa, Seongnam, Koreýa) lizirlendi we beloklar Coomassie açyk gök reňkli 10% SDS poliakrilamid jellerine ýüklendi.Mundan başga-da, beloklar 2 sagat PVDF membranalaryna geçirildi.Günbatar bölekler Alix antikoryny (Öýjükli signalizasiýa tehnologiýasy, Bewerli, MA, ABŞ) ekzosomal bellik hökmünde tassyklandy.Syçanjyga garşy HRP-konýugirlenen geçiniň IgG (H + L) (Betil Laboratories, Montgomery, TX, ABŞ) we ikinji derejeli antikor hökmünde LAS-1000 plus lýumesent şekil analizatory (Fuji Surat Film, Tokio, Japanaponiýa) ulanyldy..Geçiriş elektron mikroskopiýasy, ekzozomlaryň ululygyny we morfologiýasyny öwrenmek üçin geçirildi.BV2 öýjüklerinden izolirlenen ekzozomlar (6.40 µg / µl) uglerod bilen örtülen meslerde taýýarlandy we 1 minut üçin 2% uranil asetat bilen negatiw boýaldy.Taýýarlanan nusgalar, ES1000W Erlangshen CCD kamerasy (Gatan, Pleasanton, CA, ABŞ) bilen enjamlaşdyrylan JEOL 1200-EX II (Tokio, Japanaponiýa) ulanyp, 80 kW tizlenýän naprýa .eniýede syn edildi.
BV2-den alnan ekzozomlar, PKH26 Gyzyl Floresan Baglaýjy Kit (Sigma-Aldriç, Sent-Luis, MO, ABŞ) otag temperaturasynda 15 minut boýaldy.PKH26 belgili ekzozomlar (gyzyl) ýa-da otrisatel gözegçilik hökmünde ýok bolan U87 öýjükleri, 5 ° CO2 inkubatorda 24 sagatlap 37 ° C inkubasiýa edildi.U87 öýjük ýadrolary DAPI (gök) bilen boýaldy, U87 öýjükleri 4 ° C-de 15 minutda 4% paraformaldegidde berkitildi we soňra Leica TCS SP8 STED CW konokok mikroskop ulgamynda analiz edildi (Leica Microsystems, Mannheim, Germaniýa).synlap bolýar.
cDNA, Mir-X siRNA ilkinji setir sintezini we SYBR qRT-PCR toplumyny (Takara Bio Inc., Şiga, Japanaponiýa) ulanyp, siRNA-dan sintez edildi.Hakyky mukdar PCR iQ5 real wagt PCR kesgitlemek ulgamy (Bio-Rad, Gerkules, CA, ABŞ) SYBR Premix bilen garylan primerleri we şablonlary ulanyp ýerine ýetirildi.DNK 40 sikl üçin 95 s C-de 15 s, 60 ° C-de 60 s.Her PCR reaksiýasyndan alnan maglumatlar, iQ ™ 5 optiki ulgam programma üpjünçiliginiň (Bio-Rad) maglumat derňew modulynyň kömegi bilen derňeldi.Saýlanan maksatly genler bilen β-aktin / siRNA (we U6) arasyndaky gen aňlatmasyndaky deňeşdirmeler adaty egrilik usuly bilen hasaplandy.Ulanylýan başlangyç yzygiderlilik 1-nji tablisada görkezilýär.
3 x 104 U87 glioma öýjükleri 96 guýy tarelkä tohumlandy we 12, 18 we 36 sagatda gözegçilik hökmünde BV2 (50 μg / mL) ýa-da BV2 (50 μg / mL) -den alnan toksoplazma ýokaşan ekzozomlar bilen garyldy. .Öýjükleriň köpelmeginiň derejesi Öýjükleri sanamak toplumy-8 (Dojindo, Kumamoto, Japanaponiýa) (S1-S3 goşmaça sanlar) 46 ulanylyp kesgitlenildi.
5 hepdelik aýal BALB / c ýalaňaç syçanlar Orient Bio-dan (Seongnam-si, Günorta Koreýa) satyn alyndy we otag temperaturasynda (22 ± 2 ° C) we çyglylykda (45 ± 15 ° C) steril kapasalarda aýratyn saklandy.%) otag temperaturasynda (22 ± 2 ° C) we çyglylykda (45 ± 15%).SPF (Seul Milli Uniwersitet Medisina Haýwanlar Merkezi) mekdebinde 12 sagatlyk ýagtylyk sikli we 12 sagatlyk garaňky aýlaw geçirildi.Syçanlar tötänleýin 5 syçanjygyň üç toparyna bölündi we ähli toparlara 1 x 107 U87 glioma öýjüklerini öz içine alýan 400 ml PBS bilen sanjym edildi we ösüş faktory BD Matrigel ™ peseldi (BD Science, Maýami, FL, ABŞ).Çiş sanjymyndan alty gün soň, BV2 öýjüklerinden (Toksoplazma ýokaşmasyz / ýok) 200 mg ekzozom, çiş ýerine sanjym edildi.Çiş infeksiýasyndan 22 gün soň, her topardaky syçanlaryň çiş ululygy hepdede üç gezek kaliper bilen ölçeldi we çişiň göwrümi: 0,5 × (ini) × 2 × uzynlygy formula bilen hasaplandy.
MiRCURYTM LNA miRNA massiwini ulanyp, MicroRNA aňlatma derňewi, 7-nji nesilde mmu we rno massiwleri bar (EXIQON, Wedbaek, Daniýa) 3100 adam, syçan we syçan miRNA ele geçiriş synaglarynyň arasynda 1119 sany gowy häsiýetli syçan bar.Bu amalyň dowamynda göläniň içege aşgazan fosfatazy bilen bejermek we Hy3 ýaşyl floresan boýag bilen bellik etmek bilen 5′-fosfatdan umumy RNK-dan 250-den 1000 ng aýryldy.Bellenen nusgalar gibridizasiýa kamera toplumyny (Agilent Technologies, Santa Klara, CA, ABŞ) we gibridizasiýa slaýd toplumyny (Agilent Technologies) ulanyp, mikroarraý slaýdlary ýüklemek bilen gibrid edildi.Gibridizasiýa 56 ° C-de 16 sagatlap geçirildi, soňra mikroarraýlar öndürijiniň tekliplerine laýyklykda ýuwuldy.Gaýtadan işlenen mikroarraý slaýdlar soňra Agilent G2565CA mikroarraý skaner ulgamy (Agilent Technologies) arkaly skaner edildi.Skanirlenen suratlar “Agilent Feature Extraction” programma üpjünçiligi 10.7.3.1 (Agilent Technologies) wersiýasy arkaly import edildi we üýtgedilen Exiqon protokolynyň degişli GAL faýly ulanyp, her suratyň floresan intensiwligi kesgitlenildi.Häzirki gözleg üçin mikroarraý maglumatlar, GPL32397 goşulmak belgisi boýunça GEO maglumatlar bazasynda saklanýar.
Toksoplazma ýokaşan RH ýa-da ME49 ştamlarynyň mikroglýasynda ýetişen ekzosomal miRNA-laryň aňlatma profilleri dürli ulgam gurallary arkaly derňeldi.çişiň ösüşi bilen baglanyşykly miRNA-lar miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ulanylyp kesgitlenildi we kadalaşdyrylan signal intensiwligi (log2) bilen 8.0-den uly süzüldi.MiRNA-laryň arasynda, diferensial beýan edilen miRNA-laryň T. gondii bilen ýokaşan RH ýa-da ME49 ştamlary tarapyndan üýtgedilen miRNA-laryň süzgüç seljermesi arkaly 1,5 esse üýtgedilendigi anyklandy.
Öýjükler Lipofektamin 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, ABŞ) opti-MEM-de (Gibco, Karlsbad, CA, ABŞ) alty guýy tarelkada (3 x 105 öýjük / guýy) tohumlandy.Geçirilen öýjükler 6 sagatlap ösdürilip ýetişdirildi, soňra gurşaw täze doly gurşa öwrüldi.Öýjükler transfeksiýadan 24 sagat soň ýygnaldy.
Statistik derňew, esasan, Excel programma üpjünçiligi (Microsoft, Waşington, Kolumbiýa okrugy, ABŞ) bilen T-synagy arkaly geçirildi.Tejribeli haýwan derňewi üçin Prism 3.0 programma üpjünçiligi (GraphPad Software, La Jolla, CA, ABŞ) ulanyp, iki taraplaýyn ANOVA ýerine ýetirildi. P-bahalar <0.05 statistik taýdan möhüm hasaplandy. P-bahalar <0.05 statistik taýdan möhüm hasaplandy. Значения П <0,05 считались статистически значимыми. P bahalary <0.05 statistik taýdan möhüm hasaplandy. P 值 <0.05 被 认为 具有 统计学。。 P 值 <0.05 Значения П <0,05 считались статистически значимыми. P bahalary <0.05 statistik taýdan möhüm hasaplandy.
Bu gözlegde ulanylan ähli synag teswirnamalary Seulyň Milli uniwersitet lukmançylyk mekdebiniň institusional syn geňeşi (IRB belgisi SNU-150715-2) tarapyndan tassyklandy.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furli, J. we ş.m.2018-nji ýylda dünýädäki düwnük keseliniň we ölüminiň çaklamasy: GLOBOKAN çeşmeleri we usullary.DüşündirişJ.Rak 144, 1941–1953 (2019).
Raşid, S., Rehman, K. & Akaş, MS Beýni çişleriniň töwekgelçilik faktorlaryna we olaryň bejeriş çärelerine düşünmek. Raşid, S., Rehman, K. & Akaş, MS Beýni çişleriniň töwekgelçilik faktorlaryna we olaryň bejeriş çärelerine düşünmek.Raşid, S., Rehman, K. we Akaş, MS Beýni çişleri we esasy bejeriş çäreleri üçin töwekgelçilik faktorlaryna syn. Raşid, S., Rehman, K. & Akaş, MS 深入 了解 脑 肿瘤。。。 Raşid, S., Rehman, K. & Akaş, MS Beýni çişiniň töwekgelçilik faktorlaryna we bejeriş çärelerine çuňňur düşünmek.Raşid, S., Rehman, K. we Akaş, MS Beýni çişleri we esasy bejeriş çäreleri üçin töwekgelçilik faktorlaryna syn.Biomedikal ylym.Farmasewt.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Adamyň orodigestiw we aýal jyns ýollarynyň düwnük kesellerinde bakterial-wirus täsirleri: epidemiologiki we laboratoriýa subutnamalarynyň gysgaça mazmuny. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Adamyň orodigestiw we aýal jyns ýollarynyň düwnük kesellerinde bakterial-wirus täsirleri: epidemiologiki we laboratoriýa subutnamalarynyň gysgaça mazmuny.Kato I., Zhang J. we Sun J. Adamyň aşgazan-içege we aýal jyns ýollarynyň düwnük keselinde bakterial-wirus täsirleri: epidemiologiki we laboratoriýa maglumatlarynyň gysgaça mazmuny. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类 口腔 细菌 细菌 细菌 细菌 细菌 细菌 细菌 细菌 细菌 细菌 病毒 病毒 细菌 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Adamyň agyz boşlugynyň siňdirişinde we aýal köpeliş ýollarynda bakteriýa-wirus täsiri: meşhur kesel ylmy we laboratoriýa subutnamalary.Kato I., Ç. J. we Gün J. Adamyň aşgazan-içege we aýal jyns mäzlerinde bakterial-wirus täsirleri: epidemiologiki we laboratoriýa maglumatlarynyň gysgaça mazmuny.Rak 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL ýokançlykdan rak keseline çenli: DNK çiş wiruslary öýjük merkezi uglerodyny we lipid alyş-çalşyny nädip üýtgedýär. Magon, KL & Parish, JL ýokançlykdan rak keseline çenli: DNK çiş wiruslary öýjük merkezi uglerodyny we lipid alyş-çalşyny nädip üýtgedýär.Mahon, KL we Parish, JL Fireangynyň rak keseline ýokaşmagy: DNK esasly çiş wiruslary öýjük merkezi uglerodyny we lipid alyş-çalşyny nädip üýtgedýär. Magon, KL & Parish, JL ： 感染 ： ： DNA 肿瘤 ： ： ：。。。。 Magon, KL & Parish, JL ýokançlykdan rak keseline çenli: DNK çiş wiruslary öýjük merkezi uglerodyny we lipid alyş-çalşyny nädip üýtgedýär.Mahon, KL we Parish, JL Düwnük keseline ýokaşýar: DNK çiş wiruslarynyň öýjüklerdäki merkezi uglerod we lipid alyş-çalşyny nädip üýtgedýär.Açyk biologiýa.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM we ş.m.Şistosomlaryň we bagyr çişleriniň we helmint bilen baglanyşykly rak keseliniň katekol estrogenleri.öň.içerde gyzgyn.5, 444 (2014).